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PolyLC PolyPROPYLA色譜柱

簡(jiǎn)要描述:PolyLC PolyPROPYLA色譜柱是硅膠基材料,可通過(guò)疏水相互作用(HIC),HIC分離蛋白的方法是基于蛋白質(zhì)的疏水特點(diǎn),比如RPC。但是,HIC使用完-全含水的緩沖器,保留住了蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性。這種分離性通常優(yōu)于RPC方法分離蛋白質(zhì)和多肽,能夠極大的保留蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
  • 更新時(shí)間:2025-09-01
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:270
詳細(xì)介紹
品牌PolyLC供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合

PolyPROPYLA色譜柱是硅膠基材料,可通過(guò)疏水相互作用(HIC),HIC分離蛋白的方法是基于蛋白質(zhì)的疏水特點(diǎn),比如RPC。但是,HIC使用完-全含水的緩沖器,保留住了蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性。這種分離性通常優(yōu)于RPC方法分離蛋白質(zhì)和多肽,能夠極大的保留蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。通常情況下,樣品使用硫酸鹽或磷酸鹽等鹽濃度降低梯度洗脫,通過(guò)增加蛋白質(zhì)表面疏水性將其洗脫。表面活性劑(例如丙磺酸;辛基糖苷)如果必要的話(huà)可以被添加到流動(dòng)相的。PolyPROPYLA的相對(duì)疏水值為100。HIC比其他方法有更大的敏感性,尤其是涉及到非極性基團(tuán)。HIC適用于:

  • 多維蛋白純化(建議順序:離子交換-鹽梯度洗滌分離-HIC)。

  • 多肽的純化(比如毒液、糖肽類(lèi))

  • 表面抗體

  • 質(zhì)量控制分析蛋白質(zhì)的單一殘基的極性或者突變體的修飾位點(diǎn)。

大于20KDa的蛋白質(zhì)建議使用1000 -或1500-A的孔。其能力可以與離子交換相媲美。除非該蛋白是公-認(rèn)的顯著疏水性,建議使用PolyPROPYL A。

HIC 的問(wèn)題:

  1. 脫鹽:不幸的是,HIC 中使用的鹽不可凍干。它們可以使用色譜法(空間排阻、反相等)或透析從樣品中去除。

  2. 基線(xiàn):HIC 中使用的顯著鹽濃度梯度導(dǎo)致流動(dòng)相的折射率發(fā)生巨大變化。這可能會(huì)導(dǎo)致基線(xiàn)出現(xiàn)人為峰。例如,當(dāng)在 220 nm 處監(jiān)測(cè)流出物時(shí),使用硫酸銨梯度會(huì)產(chǎn)生一個(gè)上升的基線(xiàn),并具有較寬的*大值。根據(jù)使用的鹽和波長(zhǎng),可能會(huì)觀察到基線(xiàn)上升或下降。該問(wèn)題在 254nm 和 280nm 處不太嚴(yán)重。基線(xiàn)的變化對(duì)可以在線(xiàn)可靠檢測(cè)的蛋白質(zhì)量施加了一個(gè)下限。如果蛋白質(zhì)或肽含有色氨-酸,則通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光而不是吸光度可以完-全消除該問(wèn)題。

  3. 變性:HIC促進(jìn)三級(jí)結(jié)構(gòu)的保留,大部分蛋白質(zhì)被回收,80-100%的生物活性保留。但是,四元結(jié)構(gòu)可能會(huì)受到影響;使用的高鹽濃度會(huì)導(dǎo)致一些含有亞基的蛋白質(zhì)分解。這種影響通常與列無(wú)關(guān),并且必須在每個(gè)單獨(dú)的情況下進(jìn)行評(píng)估。

  4. 聚合:一般來(lái)說(shuō),這不是一個(gè)大問(wèn)題。傾向于在溶液中聚集的混合物有時(shí)會(huì)從 HIC 柱中以離散峰形式洗脫。聚集通常涉及疏水相互作用,但似乎色譜柱填料的疏水表面超過(guò)了單個(gè)蛋白質(zhì)單體相互結(jié)合的趨勢(shì)。

規(guī)格

具有 2µm 顆粒的色譜柱 (孔徑選項(xiàng):-10、-15。其他可用:ASK)



PolyLC PolyPROPYLA色譜柱








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